非洲猪瘟检测前采样的操作规程

汤海林

2022-05-19 17:03

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实验室检测是非洲猪瘟(以下简称非瘟)防控中最重要的一环,但是采样的科学性、规范性不仅仅影响到检测的结果,还可能影响到猪场的安危。因此,制定一套完整的采样操作规程,对提高猪场生物安全等级是很有必要的。
一、猪的采样
1、个体采样坚持尾尖血拭子+鼻拭子+肛拭子组合
由于非瘟病毒现有毒株的多样性(基因l型Georgia株、CD2V单基因缺失株、MGF单基因缺失株、CD2V+MGF双基因缺失株)导致非瘟的检测难度较以往有了较大增加,单纯的采集某个部位样本,可能会造成漏检,出现感染猪核酸检测阴性的结果。为了保证检测结果的准确性,建议采用尾尖血拭子+鼻拭子+肛拭子组合的采样方式,这样可最大程度的规避感染猪漏检的可能。
1.1尾尖血拭子采样程序
用一次性针头在猪尾巴尖进针,然后用手(戴1次性手套操作)使劲向外挤,见到血液流出后,用无菌空白专用拭子(可用医用棉签替代)蘸透血液,装入套管或者一次性自封袋中,编号,冷藏保存,同时用消毒液对采样部位进行消毒。
1.2鼻拭子采样程序
在猪静立或者躺卧时,用无菌空白专用拭子(可用医用棉签替代)伸入鼻孔2-4厘米,转几圈,让鼻腔液浸透拭子棉头,装入套管或者一次性自封袋中,编号,冷藏保存。
1.3肛拭子采样程序
用手抓紧猪尾巴,用浸透生理盐水的无菌空白专用拭子(可用医用棉签替代)伸入肛门3-5厘米,朝一个方向转动3-5圈,取出后装入套管或者一次性自封袋中,编号,冷藏保存。
1.4拭子样本采集时需要注意以下几点:
1.4.1采样时假如没有专用的采样拭子,可选医用棉签代替,但是不可使用非医用棉签。因为非医用棉签一般会使用荧光剂增白,添加了荧光剂的棉签采样可能会干扰PCR的荧光采集,出现假阳性。
1.4.2操作人员要穿一次性的隔离服,全程严格执行采一头猪更换一次手套,对采样完毕的猪即时消毒。
1.4.3采样时提前准备好装有冰块的泡沫箱以方便保存采集好的样本。样本采集完成后一定要在样品外包装上标记好对应猪耳标或者栏位号。
1.4.4血拭子之所以选择在尾巴尖上采集,就是因为尾巴尖血管细且少,出血量不大;切不可为了采样方便选择在耳静脉或者前腔静脉采集血拭子,因为一旦碰巧采集的猪对痛感非常提敏感且已染感非瘟,乱动乱跳血液溅到四周环境里,成为带毒散毒传染源。
2、群体采样坚持使用专用唾液采集袋/绳
由于大圈饲养的猪往往是多头猪一个栏,所以使用个体采样的方式不合适,只能采集口腔唾液。
2.1为了保证样品具有足够高的病毒浓度,采样前必须停水停料2个小时,并且保证猪已经将唾液采集袋/绳完全咬透,否则实验室无法分离出唾液时只能加水稀释,病毒量过低的样本就会因为这个原因检测不到,出现假阴性的情况。
2.2采样时一般是把唾液采集袋/绳固定在栏杆上,回收唾液采集袋/绳的时候,操作者一定要带上一次性手套:收集1份,更换1次手套,防止样本交叉污染。
2.3选用唾液采集袋/绳时,可用医用纱布+医用棉绳自行制作唾液采集袋;不可使用其他的可能含有荧光剂的布料、绳索,防止添加了荧光剂的布料和绳索干扰 PCR的荧光采集,出现假阳性。
二、人、车、物和环境的采样
在非瘟肆虐的严峻形势下,不同的人、车、物在猪场与猪场之间、猪场与屠宰场之间、猪场与饲料厂之间交叉交集的情况很常见,存在严重的病毒传播风险。对猪场来说,这些人、车、物的进出是无法避免的,只有加强实验室检测来提高猪场的“安全系数”,提高猪场的生物安全措施。
1、采样前物资准备
一次性口罩、0.9%生理盐水、采样纱布或采样管(须含医用棉签和5mlEP管)、剪刀、自封袋、EP管架、一次性无粉手套、油性记号笔、泡沫箱、冰块、75%酒精棉签。
2、重点部位采样
2.1人员:头发(尤其鬓发、顶部、额头和长发)、耳廓、鼻腔、指甲结合部、足底、衣服衣领和袖鞋底。携带物品:手机(屏幕及背面)、手机保护壳手机面;电脑键盘、屏幕;手表及表带、眼镜鼻架。
2.2车辆:前段保险杠、雨刮器刮片中间、车门闭合处、车门铰链处、车外脚踏板、脚垫、前排座椅上面及座椅下面、油门踏板、刹车踏板,档杆、方向盘;中央扶手箱、后排坐垫、地板;后备箱、轮胎缝、挡泥板弧形最高处、轮轴辐条;减震套、后备箱和车身连接缝、尾翼、反光镜连接处、车门开关把手(内、外)、货车后栏门活页、货车货厢前内侧两角、货车车头与车厢连接处。
2.3物资:物资外包装、内包装、装盛容器、物资表面。
2.4环境:大门、门把手、上下猪台、通道门口、道路、公用设施、垃圾表面。栋舍内环境采样:大门、门把手、窗户、饮水嘴、饮水碗、工具、料车、粪车、过道、圈门、灯具、墙面、粪沟。
3、采样程序
带好口罩、一次性手套,用记号笔在EP管磨砂处写好样品编号,将EP管置于EP管架 →每个EP管内预置不超过1毫升的0.9%生理盐水,用生理盐水湿润纱布或医用棉签→使用医用棉签或湿润纱布,在各采样部位反复擦拭→盖好EP管,将EP管置于放置冰块的泡沫箱内,或将纱布置于一次性手套内。
三、样品保存与运输
保存:密封包装2 —8 ℃(冷藏)或-15 ℃(冷冻);运输:注意泡沫箱保温隔热处理。
四、样品数量分类
1、一头猪或一栏猪为1个样;
2、人员及携带物品为1个样;
3、物资及物品分不同采购区域区分,同等区域采购点合成1个样;
4、 司机及车辆:司机、车辆单独采样各取1个样;
5、 栋舍每栋或单元可合成1个样;
6、 环境按区域划分,每块区域1个样品(例:宿舍、厨房、通道等)。
五、注意事项
1、每个样品不超过3个棉拭子,每采1个样,换一次接触采样对象的手套;
2、防止剪刀被抽样样品污染,每剪一个样品,用酒精棉签擦拭剪刀口消毒;
3、全部采样结束,耗材全部做无害化处理;
4、采样过程中采样人员身体任何部位不能接触采样对象。
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农友6735

2022-05-20 11:34

学习………

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水~龙

2022-05-19 18:25

学习。。。

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水~龙

2022-05-19 18:25

好。。。。。

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水~龙

2022-05-19 18:25

好。。。。。

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